服務(wù)熱線
021-54479081
021-54461587
-
研域課堂：原代細(xì)胞的培育辦法
發(fā)布時(shí)間： 2019-10-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 2224次1、安排塊培育法
(1)依照前述辦法取材，將安排剪成或切成1mm3巨細(xì)的小塊，并參加少許培育基使安排濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊距離0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培育瓶(底面積為17.5cm2)可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培育瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)參加適量培育基蓋好瓶塞,將瓶歪斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
(3)培育2~4小時(shí)，待小塊貼附后，將培育瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放，靜置培育，動(dòng)作要輕，嚴(yán)禁搖擺和來回振動(dòng)，以防因?yàn)榧?dòng)而使小塊漂起而造成培育失敗，若安排塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培育法
該辦法是選用前述的消化渙散法，將阻礙細(xì)胞成長的細(xì)胞間質(zhì)（包含基質(zhì)、纖維等）去除，使細(xì)胞渙散形成細(xì)胞懸液，然后分瓶培育。
3.懸浮細(xì)胞培育法
關(guān)于懸浮成長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和**細(xì)胞無需消化，可選用低速離心分離，直接培育，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培育。