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在細胞傳代培育過程中的原則、注意事項
發(fā)布時間： 2019-07-30 點擊次數(shù)： 1585次在生物醫(yī)學試驗中常常會用到細胞系，指原代細胞培育物經(jīng)傳代成功后所繁衍的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培育細胞。細胞系是經(jīng)過細胞傳代或續(xù)代培育是將細胞從現(xiàn)有的培育物分隔或分出來開端新的培育，并參加新鮮培育液來促進擴增的常用手法?？墒羌毎蹬c新分離的或原代細胞的培育條件相類似，但也有一些根本不同的當?shù)兀?br />
（1）每個細胞系需求其特定的成長因子混合物
（2）與原代細胞比較，它們的成長需求更嚴密的監(jiān)測，由于使它們無限成長的突變同時也會形成它們很快到達過度成長。因而，當細胞系成長到了簡直覆蓋整個培育器皿底部，也便是90%的密度時，細胞需求重懸洗滌用于試驗或凍存以備將來運用，或許重新接種到新的培育器皿進一步擴增。
細胞換液注意事項：
首要要注意細胞培育液的色彩，富含營養(yǎng)的新鮮培育液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培育液中的營養(yǎng)成分時，開端在培育物中堆集廢物和酸性物質(zhì)，下降pH值。因而，許多細胞培育液含有酚紅，當培育物呈酸性時會將培育液色彩由橙色變?yōu)?。培育液需在變黃之前替換。當酚紅變?yōu)榉奂t色時，說明培育基pH偏堿，不利于細胞健康成長。這時或許需求改變二氧化碳濃度并替換培育液。許多貼壁細胞系可天然附著于無涂層的塑料上。因而，塑料細胞培育板如培育皿或六孔板常常用于傳代細胞。塑料的細胞培育瓶也常常用到，如T25的細胞培育瓶，常用于擴增培育數(shù)目少的細胞或許開端培育成長緩慢的細胞系。T75細胞培育瓶常用在培育擴增速度較快的細胞系或用于成長超越T25培育瓶容量的很多細胞。在搬運貼壁細胞時，要先剪切掉細胞上與和塑料結(jié)合的蛋白。因而，消化酶胰酶常用于消化細胞。控制胰酶消化的時間很重要，由于假如處理時間過長會損壞細胞外表的蛋白。細胞培育液能中和胰酶。
所以在胰酶消化前常用磷酸緩沖液或PBS洗滌細胞。EDTA，一種鈣螯合劑有時候也用于提高胰酶的蛋白水解功能。為擴增細胞克隆，將新鮮傳代的細胞培育于細胞培育箱中，挑選適合該細胞成長條件，一般為溫度37度，二氧化碳5％和濕度95%。
傳代的不同運用：
人胚胎干細胞是一類有必要傳代的細胞。它們一般與小鼠成纖維細胞MEF共培育，后者能供給協(xié)助干細胞堅持其多能性的因子。成善于養(yǎng)殖細胞上的干細胞到了適宜的發(fā)育階段時需挑出來?？捎梦⑿鸵埔汗芴舫龌蛴貌ＡЧぞ咻p輕將其刮下然后接種于新的培育液中進行擴增。有一些細胞系對酶消化靈敏，或許貼壁很緊無法運用胰酶處理來重懸。細胞刮常用來輕輕將細胞從培育板的底部刮下來。假如細胞貼壁特別緊，可參加培育液或恰當溶液后用血清吸管用力刮擦。運用該方法時要當心，細胞比較脆弱，容易在這種機械剝離的方法中受損。為了更快并可重復性的很多擴增細胞到超越單層培育瓶容量的規(guī)模，可以運用多層培育瓶，它的培育量可達單層培育瓶的3-5倍。
細胞傳代的操作步驟
首要，重要的是要清楚細胞需求監(jiān)測的頻頻程度，這取決于該細胞的擴增速度?，F(xiàn)在培育液為亮橙色，再觀察其它成長情況。如培育液是否污濁-如污濁則或許有污染, 細胞的巨細和密度以及細胞的整體質(zhì)量。假如細胞密度到達90%，吸去細胞培育液，用無鈣離子和鎂離子的磷酸緩沖液洗滌。然后參加胰酶，置于37攝氏度約5分鐘，承認細胞脫壁后，參加新鮮細胞培育液停止胰酶的水解。將懸浮的細胞搬運到錐形管離心。細胞離心下來后，當心棄去上清，重懸細胞于新鮮培育液。計數(shù)收集到的細胞然后依據(jù)適宜密度接種細胞當即進行擴增或用于將來擴增。
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