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研域生物：抗體和重組蛋白的穩(wěn)定性你料及多少呢?
發(fā)布時(shí)間： 2019-06-06 點(diǎn)擊次數(shù)： 1828次1. 收到抗體和重組蛋白后的操作
收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請必須在 4℃，12000rpm，離心 3 分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（假如抗體和重組蛋白體積小于 50µl，請延伸離心時(shí)刻至 5 分鐘，以保證悉數(shù)抗體和重組蛋白均離心下來，干粉狀況的相同適用）?？贵w和重組蛋白運(yùn)用特制的貯存管，只要在 12000rpm 離心 3 分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體和重組蛋白悉數(shù)離心下來（即使是在 10000rpm 離心也會離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體和重組蛋白的量缺乏的現(xiàn)象）。請具體閱覽說明書，并依照引薦的保存條件正保證存和運(yùn)用抗體和重組蛋白。
2. 抗體和重組蛋白的長時(shí)刻保存
關(guān)于大部分抗體和重組蛋白，比較合適的保存辦法是：抗體分裝后保存在-20℃，重組蛋白分裝后保存在-80℃。
（1）分裝可以da程度的降低重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害，同時(shí)也降低了由于屢次從同一管中吸取抗體和重組蛋白形成的污染可能性。
（2）分裝的量以一次試驗(yàn)用完為好，少不能少于 10µl 每份。由于分裝體積越小，抗體和重組蛋白的濃度越可能會受到蒸騰以及管壁吸附的影響。
（3）復(fù)融后的分裝抗體和重組蛋白假如一次用不完，將剩余母液保存在 4℃，防止再凍起來。
（4）抗體和重組蛋白工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃ 保存盡量不要超過 1 天。
（5）防止將抗體和重組蛋白保存在自動除霜冰箱中，將抗體和重組蛋白保存在冰箱里層，防止溫度變化形成重復(fù)凍融。
3. 抗體和重組蛋白的短期保存
大部分 的抗體和重組蛋白收到后 4℃ 時(shí)刻短保存 1~2 周，對抗體和重組蛋白活性沒有影響。假如抗體和重組蛋白很快會運(yùn)用（1~2 周內(nèi)），引薦在 4℃ 保存，這是為了防止重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害。關(guān)鍵的一點(diǎn)是要根據(jù)說明書引薦的辦法來正確的保存抗體和重組蛋白。
4. 抗體和重組蛋白的運(yùn)送條件
一般的運(yùn)送進(jìn)程需要 1~2 周的時(shí)刻，所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的。4℃ 運(yùn)送首要的意圖是為了防止重復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的危害（假如運(yùn)用干冰運(yùn)送，那么收到時(shí)抗體和重組蛋白是凍起來的，為了分裝就需要凍結(jié)，這就多了一次凍融的進(jìn)程），所以運(yùn)送進(jìn)程中一般防止干冰運(yùn)送。
5. 抗體和重組蛋白的穩(wěn)定性
（1）抗體的穩(wěn)定性是自然界長時(shí)刻進(jìn)化的結(jié)果，抗體是免疫系統(tǒng)中重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化挑選的結(jié)果，在很多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
（2）抗體的高Tm值，在室溫下，乃至短時(shí)刻溫度到達(dá) 50~60℃，抗體分子都能保持正確折疊，堅(jiān)持其應(yīng)有的活性。
（3）抗體和重組蛋白的純度。選用先進(jìn)的抗體和重組蛋白純化技能，保證抗體和重組蛋白產(chǎn)品的高純度，保證其抗體和重組蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
（4）抗體和重組蛋白的濃度。高濃度的抗體和重組蛋白產(chǎn)品可削減容器表面吸附形成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體和重組蛋白穩(wěn)定性更好。大部分抗體和重組蛋白濃度為 1 mg/ml，抗體和重組蛋白純度高，特異性好，效價(jià)更高。
6. 重組蛋白的特性
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存方式，原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀況，真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定，在-80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在運(yùn)用前需進(jìn)行溶解，其間溶解的辦法非常關(guān)鍵，由于溶解不好會降低蛋白的功效。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋運(yùn)用進(jìn)程中也需要細(xì)心注意，這些都是用戶在實(shí)踐運(yùn)用中常常遇到的問題。
（1）原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白，現(xiàn)已從包涵體中提純，添加了蛋白保護(hù)劑，運(yùn)用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可，復(fù)溶凍干蛋白 100 µg，用 86µl 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解，必定不能運(yùn)用渦旋儀進(jìn)行快速振動或劇烈搖晃。
（2）真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯，還要進(jìn)行翻譯后的加工，使得蛋白質(zhì)的空間折疊辦法保持正常，所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行，如哺乳動物細(xì)胞可以識別和去除基因中的內(nèi)含子，對翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工，這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。咱們用溶液態(tài)來保存，堅(jiān)持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
（3）重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和貯存進(jìn)程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。咱們一般加 8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻撓蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改動以及凍干進(jìn)程中蛋白質(zhì)的擴(kuò)展和集合，甘露醇也是一種遍及運(yùn)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。