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細(xì)胞鋪板實(shí)驗(yàn)操作技巧
發(fā)布時(shí)間： 2019-04-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 4333次做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪板大概是常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但是有很多人不是很得要領(lǐng)，鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。怎么辦呢？以下來自研域技術(shù)人員詳細(xì)解析，請(qǐng)收好了！
一般96孔板，每孔是加100微升細(xì)胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入，加完半邊板后，將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩余的半邊板子，都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（一般輕巧敲三下），太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。
6孔板、12孔板或24孔板，均可采用將個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔一次類推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的，細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間，中間細(xì)胞多，而加在周邊晃勻后會(huì)出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。
細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對(duì)著燈光，從底部往上看，看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊，使之分散。如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話，建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯(cuò)，振幅小，頻率高。
細(xì)胞要盡量打散，大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后，要充分懸浮。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后，需要晃動(dòng)，晃的時(shí)候不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈，不然細(xì)胞就全被帶到中間去了，就會(huì)不均勻。
一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿后，正常處理，在培養(yǎng)瓶里吹勻，然后鋪6孔板，每孔2毫升，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭，然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左右前后各三圈?；旧?4小時(shí)之后再觀察，每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量，混勻后，加到六孔板里，六孔板按橫8字型晃，顯微鏡下觀察，如果不均勻，按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話，在種六孔板的過程中，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子。
放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng)，每個(gè)方向5到6次，但關(guān)鍵的是搖晃后直接放入培養(yǎng)箱中，不要再做過多的運(yùn)動(dòng)，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了。
以上呢，就是如何把細(xì)胞鋪板鋪均勻的方法，以上技術(shù)文獻(xiàn)僅供參考，如您還有疑問您可來咨詢我司技術(shù)專員，為您答疑解難！