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如何提高ELISA的重現(xiàn)性？
發(fā)布時(shí)間： 2018-11-05 點(diǎn)擊次數(shù)： 1635次免疫檢測(cè)法的性表現(xiàn)為單次實(shí)驗(yàn)孔間（批內(nèi)）的重復(fù)性和多次實(shí)驗(yàn)之間（批間）的重復(fù)性。CV值高則表明度低，通常由以下兩個(gè)原因造成：移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。
移液技術(shù)
1. 移液時(shí)，槍頭應(yīng)對(duì)準(zhǔn)孔中央，避免接觸孔壁及底部。
2. 移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。
3. 如果您的樣品具有黏性，請(qǐng)預(yù)先潤(rùn)洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。
4. 移液不充分或移液體積不均，說(shuō)明移液器需要校正。必要時(shí)請(qǐng)檢查移液器并重新校正。
5. 加樣時(shí)，不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭，避免交叉污染。
6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無(wú)法正確量取吸液和加樣的體積。
洗滌技術(shù)
1. 如果使用自動(dòng)洗板機(jī)或多通道移液器，請(qǐng)確保進(jìn)出口能正常運(yùn)作。
2. 后一次洗滌后，翻轉(zhuǎn)酶標(biāo)板倒出多余的洗滌液，并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會(huì)降低度。不能讓孔內(nèi)液體自然風(fēng)干，需立即進(jìn)行下一步操作。
3. 按照說(shuō)明書，添加足量的洗滌液至孔內(nèi)，并保證洗滌*。
4. 由于洗滌液不是通用的，當(dāng)試劑盒內(nèi)的洗滌液用完時(shí)，請(qǐng)不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要，可聯(lián)系技術(shù)支持尋求幫助。
5. 不要減少洗滌時(shí)的浸泡時(shí)間或跳過(guò)浸泡的步驟。
6. 按照說(shuō)明書上推薦的洗滌次數(shù)清洗，隨意改變洗滌的次數(shù)會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的性。
貯液瓶
為避免污染，不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染（比如唾液、氧化劑等），請(qǐng)參考說(shuō)明書操作。必要時(shí)候采取一些預(yù)防措施保護(hù)溶液。
封板覆膜
使用過(guò)的封板覆膜可能含有上一步實(shí)驗(yàn)殘留的試劑，如果重復(fù)使用會(huì)造成孔板污染，從而導(dǎo)致性低。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。