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不同類型的樣本的處理辦法
發(fā)布時(shí)間： 2017-09-15 點(diǎn)擊次數(shù)： 1699次一般我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培育上清或安排勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。
1、血清
血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上，使血清分出。（將試管或離心管歪斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的分出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，細(xì)心搜集上清。主張將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
采血過程中應(yīng)防止溶血，由于紅細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為符號(hào)的ELISA檢測中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染，由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導(dǎo)致檢測的假陽性。
2、安排勻漿液
1）將安排樣本用PBS (0.01錨點(diǎn)錨點(diǎn)M, PH 7.4) 沖刷，洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。
2）將安排塊稱重，記載后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充沛
3）將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS（臨用前參加蛋白酶按捺劑）勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。（一般按安排分量：PBS體積=1:9的份額勻漿，例如1g的安排樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，詳細(xì)體積可根據(jù)試驗(yàn)需求恰當(dāng)調(diào)整，檢測后核算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）
4）吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
3、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本，標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。防止運(yùn)用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時(shí)還應(yīng)細(xì)心閱讀試劑盒說明書，查看試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。
4、細(xì)胞培育上清
取細(xì)胞培育上清到離心管，1000×g離心20min，除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
5、細(xì)胞裂解液
1）吸去培育板內(nèi)的培育基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培育基將細(xì)胞從培育板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省掉。
2）搜集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培育基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
3）參加適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前參加蛋白酶按捺劑）重懸細(xì)胞。一般6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。
4）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，重復(fù)凍融幾回，使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的意圖。
5）4℃ 10000×g 離心10min，除掉細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測。
總的來說，由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體，沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。
為了確保檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。