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研域生物公司: 研究牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)原理
發(fā)布時(shí)間： 2017-08-16 點(diǎn)擊次數(shù)： 1508次牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一。在培養(yǎng)基中加入適量血清（10%），首先可以補(bǔ)充細(xì)胞生長所需的生長因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性；再次，它還能中止胰酶的作用，并保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷等。但是血清成分復(fù)雜，不同來源、不同批號(hào)生產(chǎn)的血清對細(xì)胞生長作用的差異較大。血清的保存期只有一年，不同存放時(shí)期的血清的效力也不同。所以，當(dāng)新購得的血清或要在開始一個(gè)重大試驗(yàn)的時(shí)候，應(yīng)首先進(jìn)行牛血清的篩選。 篩選時(shí)，通常選用正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，也可以使正要準(zhǔn)備培養(yǎng)的細(xì)胞。另外，用已知血清作對照。
儀器、材料和試劑
儀器
CO2 培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)，微量加樣器，滅菌鍋
材料
96孔培養(yǎng)板，刻度吸管，移液管，試管，吸管，廢液缸，血球計(jì)數(shù)板，HeLa細(xì)胞，Mel細(xì)胞
試劑
DMEM，不同批號(hào)的血清，胰酶，雙抗
實(shí)驗(yàn)步驟
1.取HeLa細(xì)胞和Mel細(xì)胞（本來應(yīng)該取正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，但是實(shí)驗(yàn)室條件有限，本組做HeLa細(xì)胞），胰酶消化后，用無血清培養(yǎng)基（事先加雙抗）吹打成細(xì)胞懸液（避免以前血清的干擾）。計(jì)數(shù)。
2.取4000個(gè)左右的HeLa細(xì)胞加入到每行的*孔（在加之前要震蕩培養(yǎng)基）。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)計(jì)數(shù)后應(yīng)加11μL細(xì)胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含標(biāo)準(zhǔn)血清（2004.12）的培養(yǎng)基。（對照組）
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。
5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個(gè)孔到zui后一個(gè)孔的細(xì)胞梯度從大約2056，1028等至1個(gè)。（要吹細(xì)均勻）
6.每個(gè)孔再補(bǔ)加100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營養(yǎng)物質(zhì)。
7.在B行采取同樣的方法。白介素ELISA試劑盒不同的是用含有需篩選的批號(hào)為011217血清代替標(biāo)準(zhǔn)血清。
8.在C至G行采用同樣的方法。血清批號(hào)分別是030224，040528，040830，041012，041016。
9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周。
10. 培養(yǎng)結(jié)束后，觀察細(xì)胞生長的情況。比較在同一細(xì)胞濃度下的不同學(xué)清對細(xì)胞生長的影響。在同一細(xì)胞濃度下細(xì)胞生長數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。